Цель работы.
Рассмотреть окрашенные споры сенной палочки под микроскопом.
Материалы и оборудование.
Настой сена, карболовый фуксин, метиленовый синий, 5-процентный раствор серной кислоты, фильтровальная бумага, часы, спиртовка или горелка, микроскоп.
Краткое теоретическое пояснение.
Сенная палочка при наступлении неблагоприятных условий образует эндогенно (внутри клетки) спору. Спора служит для сохранения вида в неблагоприятных условиях существования, так как более устойчива к перенесению высоких и низких температур и обезвоживанию, чем вегетативная клетка. Попадая в благоприятные условия, спора прорастает. Оболочка ее лопается, бактериальная клетка получает возможность поглощать вещества из окружающей среды и расти.
Чтобы рассмотреть споры под микроскопом, их необходимо окрасить. Однако оболочка спор устойчива к действию большинства химических веществ, в том числе красителей, поэтому плохо прокрашивается. Чтобы споры прокрасились, препарат необходимо сначала протравить кислотой, а затем произвести окрашивание концентрированным раствором красителя при высокой температуре. При этом оболочки спор адсорбируют краску, причем так прочно, что не обесцвечиваются даже при последующей обработке кислотой.
Ход работы.
Для работы используют элективную культуру сенной палочки, в которой образовались споры.
Стерильной стеклянной палочкой переносят кусочек пленки с жидкостью на предметное стекло и фиксируют над пламенем горелки. На неостывший препарат наносят карболовый фуксин и нагревание продолжают до появления паров (не доводить до кипения!). По мере испарения добавляют свежей краски. Окрашивание длится 2—3 мин. После промывания в струе воды препарат погружают в 5-процентный раствор серной кислоты для обесцвечивания цитоплазмы. Затем дополнительное окрашивание цитоплазмы проводят метиленовым синим в течение 1—2 мин, после чего препарат промывают водой, высушивают фильтровальной бумагой и рассматривают под микроскопом. Споры окрашиваются фуксином в красный цвет, а цитоплазма клетки—в слабо-синий.
Вывод.
Споры сенной палочки можно обнаружить лишь после двойного окрашивания.
Контрольные вопросы.
1. Какую роль в жизни бактериальной клетки играет спора?
2. Как проводят двойное окрашивание спор?